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实验笔记丨CRISPR-dCas9实验步骤详解
1、载体酶切 准备灭菌的PCR离心管，配制酶切体系，放置PCR仪，孵育3小时，终止酶切后使用1%琼脂糖凝胶电泳进行鉴定。琼脂糖凝胶DNA回收 将吸附柱置于收集管中，加入Buffer BL，离心活化硅胶膜；在紫外灯下，用刀片切下目的条带，尽量去除非目的DNA，确保体积最小。
2、sgRNA长度：SpCas9一般为20nt。 sgRNA序列碱基组成：基因特异的sgRNA模板序列位于PAM序列前，PAM序列特征为NGG （N为任意核苷酸），选择3末端含有GG的sgRNA，可构成PAM序列。sgRNA序列应避免以4个以上的T结尾，GC含量最佳为30%-70%（40%-60%）。
3、实验流程介绍 天然的CRISPR-Cas9系统由三部分组成：SpCas9 （简称Cas9）、crRNA、tracrRNA。tracrRNA（在CRISPR-Cas9编辑技术中被优化并命名为gRNA scaffold），它负责与Cas9结合，与重复序列具有同源性。crRNA为引导序列，约20个碱基，具有特异性。
4、前阵子才写道 ： CRISPR-Cas9基因敲除实验步骤 Month 4 --可能的收官之帖（但还远未结束） 说自己收官之作，哪里想到这么快就要继续开始新的实验了。
5、CRISPR/Cas9实验流程包括sgRNA设计，这一关键步骤确保实验的成功。设计原则主要聚焦于20nt靶点的II型CRISPR系统（如SpCas9），确保sgRNA序列的碱基组成（基因特异性模板序列前）遵循NGG（N为任意核苷酸）的PAM序列规则。避免sgRNA序列以4个以上的T结尾，同时保持GC%含量在30%-70%。
淘宝白黒号是什么意思?黑号有何影响?
1、淘宝白号就是注册出来之后没有买过东西的，也就是没有点数的号，一般买过东西之后得到卖家的好评之后就会有点数，那个时候就已经不是白号了，白嘛就是干干净净的那种，但是现在的意思有点不一样，好像只要不是1心的都叫做白号吧。黑号：所谓黑号，在淘宝官方并没有这一规则和定义。
2、淘宝白号是指淘宝账号的一种状态，即该账号没有任何违规记录，权重较高，可以享受淘宝平台的一些优惠政策和服务。淘宝白号与黑号相对，黑号通常是因为账号存在违规行为，如刷单、恶意评价、售假等行为，被淘宝平台标记并限制其部分功能或降低其权重。
3、淘宝白号就是没有购买、信誉、实名的账号。黑号就是频繁参与虚假交易、钻淘宝系统bug、退款、购买白菜单等等，导致被淘宝监控的账号。
闲置的沃尔玛购物卡哪里回收?
1、通过门店回收 前往最近的沃尔玛门店：找到您附近的门店，并前往客服中心。咨询沃尔玛购物卡回收政策：与客服人员沟通，了解沃尔玛购物卡回收的具体政策和操作流程，包括可能涉及的手续费或回收时间。通过朋友或亲戚转让 找到接手人：在您的亲友圈中寻找对沃尔玛购物卡有需求的人。
2、通过沃尔玛门店或官方网站回收：您可以直接携带不需要的购物卡前往沃尔玛门店进行回收，门店工作人员会在系统中验证购物卡的有效性后进行回收处理。通过线上回收平台回收：线上回收是一种便捷的方式。您可以选择一些专业的线上卡券回收平台，如京顺回收、卡小白等。
3、沃尔玛购物卡线上回收方法 ：第一步：微信搜索“京顺回收”公众号，选择卡券转让；第二步：点击电商卡，选择沃尔玛购物卡；第三步：选择正确的面值，输入卡号和卡密，点击立即兑换提交；第四步：等待几分钟后，个人中心提现到账。二手交易平台：另一个可行的方法是在二手交易平台上出售沃尔玛购物卡。
4、沃尔玛购物卡可以通过多种方式进行回收。以下是一些主要的回收方法：线上回收平台 微信小程序或公众号 线下回收点：如果您不太熟悉网络操作，可以选择线下回收。在沃尔玛线下门店附近，可能会发现一些专门的沃尔玛购物卡回收点 。
5、在面对沃尔玛卡2326需要回收时，寻找一个可靠且合适的回收平台成为关键。市场上回收平台众多，让人眼花缭乱，而其中规模最大的当属淘淘收。当我们提及回收平台的“大”，它往往体现在多个方面。
京东白号怎么黑了
1、“如果发生京东账号领不了优惠券的情况，排除网络和京东系统正常的情况的话，大概率可能被黑号了。”小黑号已经开始进入京东黑名单了。主要表现形式为抢不到全品券，第三方辣鸡券输入验证码可以拿到。然后除了会员签到和京豆签到，任何地方得不到签到京豆。严重一点会导致抢购失败，就是秒杀全部不能下单。
2、京东白号即安全账号，也就是京东账户没有出现违规的行为，状态一直正常。如果京东账户批量进行注册，这时注册的账户都是黑号，黑号在使用时某些功能会受到限制。所以，用户在平时要使用白号，不能使用黑号。
3、京东黑号怎么恢复白号？找客服，直接说明原因，最好能配一些图片，证明帐号确实有问题，当然这只适合一般代下比较少的用户，如果多了，基本不要找了，客户会直接告诉你，说最近下单异常，尽量少下一些不同地址的订单，基本上白不了了。
4、频繁参与活动、多地点下单、拒收、拆单、使用小额京卷秒杀、领券不使用、无理纠缠客服、频繁取消订单、多个账号使用同一收货信息，都可能被黑号。防范措施包括注意活动频率，理性领券，避免不合理的客服互动，以及不频繁取消订单。黑号后恢复困难，建议谨慎行事。
5、黑号慢慢的养，经常在京东购物，尽量在移动端下单，不要多次退款或者拒收，就能慢慢的恢复白号。手机：华为p30 系统：EMUI1 软件：京东APP 如果需要账号变白，可以经常在此平台进行购物。大家购物有电脑和手机，需要恢复白号应尽量在移动端下单。还有就是购物完成后，不要多次退款或者拒收。
高中物理
1、高中物理是高中理科（自然科学）基础科目之一。该书是普通高中课程标准实验教科书。概念定义：物理学（physics）词源是希腊文physis即自然，也就是关于自然的科学。研究对象：物理学是一门重要的自然科学，它研究的是物质世界有关的问题。
2、一般来说是一学期两本书，必修共5本，高二第一学期第一学段（期中考试）上完。选修继续按号排，选修6-11。一般都只学到选修8（高二结束），重点校讲选修9。外国语类学校要学到选修11，但选9-11都是从头复习内容。
3、新版高中物理教材有7本（2本必修和5本选修）。必修必修选修3-1（电学）、选修3-2（电磁感应，变压器，传感器）、选修3-3（热学）、选修3-4（振动与波）、选修3-5（动量与原子物理）。新高考高中物理是几本书新版高中物理教材有7本（2本必修和5本选修）。
今年几月几号白露2023
1、年白露时间：9月8日5点26分31秒，星期五，农历七月廿四。白露，是“二十四节气”中的第15个节气，秋季第3个节气，“白露”是反映自然界寒气增长的重要节气。由于天气逐渐转凉，白昼有阳光尚热，但傍晚后气温便很快下降，昼夜温差大。
2、年白露时间：9月8日05：26：31，星期五，农历七月廿四。白露代表天气渐渐转凉。白露是一个反映自然界气温变化的重要节令，基本结束了暑天的闷热，是秋季由闷热转向凉爽的转折点。古人以四时配五行，秋属金，金色白，故以白形容秋露。
3、年白露开始时间：09月08日05：26：31，星期五，农历七月廿四；2023年白露结束时间：09月23日14：49：46，星期六，农历八月初九。白露是农历二十四节气之一，当太阳到达黄经一百六十五度时为白露节气。白露是秋天的第三个节气，表示孟秋时节的结束和仲秋时节的开始。
4、白露是秋季的节气，2023白露公历时间：9月8日5点26分31秒，农历七月廿四号，星期五。白露是秋季的第三个节气，属于孟秋时节的结束和仲秋时节的开始，也就是开始进入秋天中期。这个时候夏季的暑热才是真正消散，寒气渐深，温差变大。
5、年9月8日5点26分31秒是白露节气，白露时节最明显的感觉就是昼夜温差较大，夜间会感到一丝丝的凉意，虽然暑热可能不会一下子退场，但是闷热感会逐渐褪去，早晚添了一份秋天的凉意。由于天气逐渐转凉，白昼阳光尚热，太阳归山，气温便很快下降。
6、年白露农历时间：七月廿四 2023年白露星期时间：周五 白露三候一候：鸿雁来 鸟从北向南飞，大曰鸿，小曰雁。鸿雁是一种大型的水鸟，主要是在河流、湖畔等地方活动。每年到了9月初就要开始迁徙。因为这种鸟喜欢成群活动，特别是在迁徙的季节，常常集成数数百、甚至上千只的大群。
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